Làm thế nào để tạo ra bộ đệm TAE

Bộ đệm TAE là một dung dịch gồm có gốc Tris, axit axetic và EDTA (Tris-acetate-EDTA). Về mặt lịch sử, bộ đệm phổ biến nhất được sử dụng cho điện di gel agarose trong các phân tích các sản phẩm DNA do sự khuếch đại PCR, các phương pháp tinh chế DNA hoặc thí nghiệm nhân bản DNA.

Bộ đệm này có độ ion thấp và khả năng đệm thấp. Tốt nhất là sử dụng điện di của DNA lớn (> 20 kb) và cần được thay thế thường xuyên hoặc luân chuyển trong thời gian chạy dài hơn (> 4 giờ).

Với ý nghĩ đó, bạn có thể xem xét một vài đợt của bộ đệm.

Cho rằng bộ đệm dễ thực hiện và các bước có thể được thực hiện nhanh chóng, làm nhiều lô một lần không nên tốn nhiều thời gian hoặc khó kéo. Sử dụng hướng dẫn dưới đây, chỉ mất 30 phút để tạo bộ đệm TAE. Đây là cách:

Chuẩn bị một giải pháp của EDTA

Một giải pháp EDTA (ethylenediamine tetraacetic) được chuẩn bị trước. EDTA sẽ không hòa tan hoàn toàn vào dung dịch cho đến khi độ pH được điều chỉnh đến khoảng 8. 0. Đối với dung dịch mẫu 500 ml 0,50 M EDTA, cân nặng 93. 05 gram muối disodium EDTA (FW = 372. 2 ). Hòa tan trong nước khử ion 400 mililít và điều chỉnh độ pH bằng natri hydroxyd (NaOH). Đậy dung dịch lên một khối lượng cuối cùng là 500 mililit.

Thực hiện một giải pháp cổ phần (50x) của TAE bằng cách cân 242 gram cơ sở Tris (FW = 121. 14) và hòa tan nó trong khoảng 750 mililiters của nước deionized.

Cẩn thận thêm 57. 1 ml axit glạch và 100 ml 0,5 M EDTA (pH 8 0). Sau đó, điều chỉnh dung dịch cho thể tích cuối cùng là 1 lít. Giải pháp chứng khoán này có thể được lưu trữ ở nhiệt độ phòng. Độ pH của bộ đệm này không được điều chỉnh và phải là khoảng 8. 5.

Chuẩn bị một giải pháp làm việc của TAE

Giải pháp làm việc của bộ đệm TAE 1x được thực hiện bằng cách đơn giản pha loãng dung dịch gốc xuống 50 lần trong nước deionized.

Nồng độ dung môi cuối cùng là 40 mM. Tris acetate và 1 mM EDTA. Bộ đệm bây giờ đã sẵn sàng để sử dụng trong gel agarose.

Những gì bạn cần cho bộ đệm

Vì việc tạo bộ đệm TAE chỉ đòi hỏi một bộ hướng dẫn đơn giản và nhanh chóng, số lượng vật liệu cần thiết cho nó không phải là quá nhiều. Bạn chỉ cần EDTA muối disodium, bazơ Tris, và acid acetic băng.

Việc làm bộ đệm cũng đòi hỏi phải có bộ đo pH và tiêu chuẩn hiệu chuẩn, nếu thích hợp. Bạn cũng cần 600 lít và 1500 mililiters beakers hoặc flasks cũng như xi lanh tốt nghiệp. Cuối cùng, bạn sẽ cần nước deionized, khuấy thanh, và khuấy đĩa.

Đóng gói lên

Bạn dự định làm bộ đệm ở đâu? Tại địa điểm trường học, nơi làm việc, hoặc địa điểm khác, chẳng hạn như nhà bạn ở đâu?Kiểm tra khoảng không quảng cáo trước khi bạn bắt đầu đảm bảo rằng bạn có tất cả các tài liệu trên cho bộ đệm TAE.

Nếu bạn không muốn phải trả phí vật liệu, hãy chọn để làm bộ đệm bên ngoài nhà bạn. Bạn có thể dễ dàng đặt hàng các vật liệu bạn cần trực tuyến hoặc ghé thăm một cửa hàng đặc sản cho họ.