Làm thế nào để làm bộ đệm TBE trong 3 bước dễ dàng

Dung dịch đệm TBE là dung dịch đệm tạo thành Tris base, axit boric và EDTA (hoặc Tris-borate-EDTA). Bộ đệm này thường được sử dụng cho điện di gel agarose trong phân tích các sản phẩm DNA do sự khuếch đại PCR, các phương pháp tinh chế DNA hoặc các thí nghiệm nhân bản DNA.

Bộ đệm TBE đặc biệt hữu ích cho việc phân tách các đoạn ADN nhỏ hơn (MW <1000), chẳng hạn như các sản phẩm nhỏ của tiêu hóa enzyme hạn chế.

TBE có dung lượng đệm cao hơn và sẽ cho độ phân giải sắc nét hơn bộ đệm TAE. Dung dịch TAE là một dung dịch gồm có gốc Tris, axit axetic và EDTA (Tris-acetate-EDTA).

TBE nói chung đắt hơn TAE và ức chế DNA ligase, có thể gây ra vấn đề nếu các bước tinh chế DNA và ligation theo sau. Với ba bước đơn giản sau, hãy tìm hiểu cách làm bộ đệm TBE. Không nên mất hơn 30 phút để tạo bộ đệm này. Đây là cách:

Chuẩn bị một giải pháp của EDTA

Một giải pháp EDTA (ethylenediamine tetraacetic) phải được chuẩn bị trước. EDTA sẽ không hòa tan hoàn toàn trong dung dịch cho đến khi pH được điều chỉnh đến khoảng 8 o. Đối với dung dịch gốc 500 ml 0,2 M EDTA, cân nặng 93. 05 gram muối disodium EDTA (FW = 372. 2). Sau đó, hòa tan nó với 400 ml nước đã khử ion và điều chỉnh độ pH bằng NaOH. Sau đó, đổ dung dịch lên một khối lượng cuối cùng là 500 ml.

- Chuẩn bị một giải pháp cổ phần của TBE

Tạo một dung dịch cô đặc (5x) TBE bằng cách cân 54g cơ sở Tris (FW = 121.14) và 27. 5 g boric acid (FW = 61. 83) và hòa tan cả trong khoảng 900 ml nước dei hoá. Sau đó thêm 20 ml EDTA 5 M (pH 8 0) và điều chỉnh dung dịch cho thể tích cuối cùng là 1 lít.

Dung dịch này có thể được lưu trữ ở nhiệt độ phòng, nhưng kết tủa sẽ hình thành trong các dung dịch cũ. Lưu trữ đệm trong chai thủy tinh và loại bỏ nếu một kết tủa đã hình thành.

Chuẩn bị một giải pháp làm việc của TBE

Đối với điện di gel agarose, một dung dịch TBE có thể được sử dụng với nồng độ 0x (pha loãng 1: 10). Dung dịch pha loãng pha loãng 10 lần trong nước khử ion. Nồng độ dung môi cuối cùng là 45 mM Tris-borat và 1 mM EDTA. Bộ đệm bây giờ đã sẵn sàng để sử dụng trong gel agarose.

Những gì bạn cần

Để làm đệm TBE, bạn chỉ cần bốn chất. Các mục còn lại trong danh sách này là thiết bị. Bốn chất được yêu cầu là muối EDTA disodium, gốc Tris, axit boric và nước khử ion.

Đối với thiết bị, bạn cần một đồng hồ đo pH và tiêu chuẩn hiệu chuẩn, nếu thích hợp. Thêm vào đó, bạn cần 600 ly và 1500 mililiter beakers hoặc flasks. Tròn ra nhu cầu thiết bị của bạn là xi lanh tốt nghiệp và khuấy các thanh và khuấy đĩa.

Kiểm tra khoảng không quảng cáo tại phòng thí nghiệm mà bạn sẽ sử dụng để đảm bảo bạn có mọi thứ bạn cần trước khi bắt đầu. Không có gì tồi tệ hơn việc phải dừng lại ở giữa việc chuẩn bị một giải pháp bởi vì bạn đã hết các vật liệu thích hợp.

Nếu phòng thí nghiệm của bạn ở trường hoặc nơi làm việc của bạn, kiểm tra với nhân viên thích hợp để thấy rằng họ có tất cả các mặt hàng trong kho. Làm như vậy có thể tiết kiệm cho bạn thời gian và năng lượng cuối cùng.